GelRed是一种稳定、安全、灵敏的核酸荧光染料,通过静电及电荷相互作用结合到核酸上,可直接替代剧毒的溴化乙锭(EB),且灵敏度远高于EB,常用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶中dsDNA(双链DNA)、ssDNA(单链DNA)或RNA的染色。GelRed结合单链DNA和RNA荧光信号约是结合双链DNA的一半左右。

经过一系列的测试,GelRed对于手套和细胞膜都是不能穿透的。在浓度远高于凝胶染色工作浓度的情况下,染料也是无细胞毒性和非诱变性的。

GelRed是如何工作的?


(相关资料图)

与溴化乙锭一样,GelRed是一种嵌入DNA的核酸染料。GelRed仅通过嵌入结合。

当显示紫外光时,嵌入的GelRed会发出荧光,产生明亮的橙色光。 两种产品的光谱几乎相同; 然而,GelRed被认为是比EtBr更安全的替代品,而且更敏感。GelRed的另一个好处是它能够与dsDNA、ssDNA和RNA一起工作,而对于dsDNA,它的灵敏度是ssDNA和RNA的两倍。

比较GelRed和溴化乙锭(EB)在1%琼脂糖预制凝胶(TBE缓冲溶液)中的染色效果。使用1kb Plus DNA Ladder样品两倍梯度稀释上样,各泳道上样量从左到右依次为200ng,100ng,50ng和25ng。使用300nm激发的凝胶成像系统和EB滤光片成像并使用Polaroid 667黑白打印

如果GelRed是一种嵌入剂,为什么它没有与溴化乙锭相同的风险?

如果它仍然要直接与DNA结合,想知道它如何才能真正安全似乎是合乎逻辑的。 虽然GelRed和EtBr都嵌入DNA,但GelRed的创建使其不会穿透细胞膜。 因为它不能穿透细胞膜,所以GelRedTM对活细胞没有毒性。

GelRed:用于聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)的核酸凝胶染色剂

原始的GelRed®染料的安全性部分得益于其较大的分子尺寸,这使得该染料对于细胞膜具有不可渗透性。然而,这种大分子尺寸也会降低GelRed®染料进入密集的聚丙烯酰胺凝胶的能力。为了解决这个问题,Biotium采用了一种新方法,使得新版本的PAGE GelRed®染料具有细胞膜不可渗透性,而不会使其分子尺寸过大

PAGE GelRed®核酸凝胶染料:

· 一种安全而敏感的聚丙烯酰胺凝胶染料

· 在AMES试验中无毒性和无致突变性

· 水基配方,不渗透乳胶和丁腈手套

· 对水生生物无毒,可由EPA Title 22危险废物测试进行排放处置。

为什么GelRed会改变DNA的迁移?

GelRed影响DNA迁移的原因有很多。 请记住,所有核酸染料都会对DNA的移动方式产生一定的影响。GelRedTM是一种比EtBr重得多的染料,GelRed对DNA的亲和力意味着凝胶中加载的DNA越多,GelRedTM与DNA结合并扭曲该片段的运动的次数就越多。

一些防止或最小化GelRed对迁移影响的建议是: 将其用作后染色剂(我们对此再强调不过分)。 确保您的GelRed储备溶液已适当稀释。 您可能还需要减少您使用的DNA量,以尽量减少迁移干扰的影响。

GelRed和GelGreen有什么区别?

1.每种产品的荧光。 如您所料,GelRed会发出类似于溴化乙锭的红色荧光。GelGreen会发出与SYBR Green非常相似的绿色荧光。 任何一种产品都可以与紫外线透射仪一起使用。

2.染色敏感性。GelRed是一种比GelGreen更敏感的染色剂(灵敏度大约是GelGreenTM的五倍),尤其是对于单链核酸。

3.在应用方面,GelRed与聚丙烯酰胺凝胶兼容,但不推荐用于GelGreen。

4.使用GelGreen的一个优点是它与蓝光透射仪的兼容性,如果您想避免紫外线照射,这将很有帮助

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